<2023년 정기 학술대회 포스터 발표>[P73] Therapeutic effect of cardiovascular spheroids generated by microfluidic concave system : 사단법인 한국동물생명공학회

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번영로2023-06-21 13:50

Fig 5.에서 세포 생착에 대한 결과는 있는데...기능 평가에 대한 결과가 있나요?

노경무2023-06-21 13:55

Q. 연구자는 Figure 1.D, Figure 2.B 처럼 microfluidic system을 통하여 서로 다른 형태의 Spheroid를 만든 것으로 보입니다.
서로 다른 형태의 Spheroid를 제작: 1) Only CMs spheroid인 경우, 2) EC aggregates+외부 CMs로 encapsulation 시킨 경우, 3) CM aggreagates+외부 ECs로 encapsulation 시킨 경우. 다음과 같이 각각 다른 형태의 Cardio-vascular spheroid 를 제작하였을 때 각 형태에 따른 기능성에는 어떠한 차이를 보이는지 궁금합니다. ex) cell viability, beating rate, 심근 기능성 marker의 발현 등

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배대경2023-06-21 15:53

Fig 4A 결과에서 6개월 냉동보존 하였다고 하는데, 최대 얼마나 보관이 가능한지요?

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민경혁2023-06-21 16:37

Fig 3A의 실험에서 세포를 한번에 plating 하는 것인지 아니면 특정 순서대로 하는 것 인지를 질문 드리고 싶습니다. 또 세포 수는 얼만큼 사용하는 것이 좋은지 궁금합니다.

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김성민2023-06-21 21:04

1. 연구진의 시스템을 다른 세포 연구에 사용해 보신 경험이 있으신지요? 초기 배아의 발생 연구 등.
2. 구형으로 제작하기 위해, 사용하신 세포의 주입 순서가 중요한지요?
3. 개발하신 시스템을 저희 연구에 활용하고 싶습니다. 혹, 어떻게 문의하면 좋을지 알려주시면 감사하겠습니다.

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박윤귀2023-06-23 14:08

작성하여주신 질문에 대하여 답변드리도록 하겠습니다.

[번영로연구원님]
초음파 분석을 진행하였으며, 포스터에는 결과를 포함하지 못하였지만, 출판 논문에는 초음파 분석으로 심근벽의 두께와 좌심실 박출률로 심장 기능을 평가하였을 때 single cell 이식군과 비교하였을 때 유의적인 기능 회복의 결과를 확인하여, 첨부하였습니다.

[노경무연구원님]
Spheroids를 제작함에 있어, 2) EC aggregates+CM encapsulation의 방법이 제작된 Spheroids 조직화가 강화되 심근세포의 유전자,단백질, 전기생리학적으로 심근세포 성숙화 지표가 증가하는 것을 확인하였습니다. 1) only-CM spheroid의 경우 세포의 조직화 정도가 낮고, 3) EC encapsulaion의 경우 심근세포가 내부에 놓이게 되어 저산소 환경에 의한 낮은 생존률을 확인하였습니다.

[배대경연구원님]
본 연구에서는 6개월 간의 동결 보존을 진행하였으나, 일반적인 세포의 동결 형태와 유사하게 액체질소에서 보관이 진행되기 때문에 이론 상 영구적인 보존이 가능할 것으로 생각됩니다.

[민경혁연구원님]
1. 본 연구에서는 Fig 1.D에 제시된 방법인 (1) 1개의 세포 유형으로 spheroid를 형성하는 방법, (2) 여러 유형의 세포를 함께 파종해 세포가 혼합된 형태의 Spheroid를 형성하는 방법, (3) 세포를 순서대로 주입하여 encapsulation spheroid를 형성하는 방법을 이용하였습니다. 원하는 형태에 따라 세포를 주입하는 방식이 달라질 수 있으며, 현재의 연구에서는 Co-culture 2 방법을 이용해 먼저 endothelial cell을 seeding해 aggregation을 만든 후 cardiomyocyte를 seeding하여 endothemial cell을 encapsulation하는 형태의 spheroid를 제작하였습니다.

2. 세포 수 역시 사용하는 세포의 종류 및 개별 세포의 크기에 따라 달라질 수 있으며, 저희의 연구에서는 1개의 microfluidic system에 5*10^4 ~ 1*10^6 정도의 세포를 이용하였습니다.

[김성민연구원님]
1. Fibroblast, MSC, hepatocyte 등의 세포를 본 시스템에 접목하여 Co-culture, Drug screening 연구를 수행하였으며, 전분화능줄기세포를 본 시스템에 접목하여 이용하여 혈관내피세포로 분화유도하는 연구를 통해 논문을 출판한 바 있습니다. 초기 배아 발생과 관련한 연구는 아직 수행해 본 바는 없으나 충분히 활용할 수 있을 것으로 생각됩니다. 말씀하신 내용과 관련하여 연구 방향을 설정 후 진행해 볼 수 있도록 하겠습니다.

2. 본 연구에서는 Fig 1.D에 제시된 방법인 (1) 1개의 세포유형으로 spheroid를 형성하는 방법, (2) 여러 유형의 세포를 함께 파종하여 세포가 혼합된Spheroid를 형성하는 방법, (3) 세포를 순서대로 주입하여 encapsulation spheroid를 형성하는 방법을 이용하였습니다.
단순히 구조체를 만들기위해서는 세포의 주입 순서가 중요하지 않으며, 원하는 형태에 따라 세포를 주입하는 방식이 달라지게 됩니다.
현재의 연구에서는 Co-culture 2 방법을 이용해 먼저 endothelial cell을 seeding해 aggregation을 만든 후 cardiomyocyte를 seeding하여 endothemial cell을 encapsulation하는 형태의 spheroid를 제작하였습니다.

3. 개발된 시스템의 사용 및 정보수신을 위해서는 출판된 논문의 교신저자이신 문성환 교수님 또는 초록에 작성된 본 연구원의 이메일 주소 (pyg9168@cau.ac.kr) 연락을 주시면 답변을 드리도록 하겠습니다.

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<2023년 정기 학술대회 포스터 발표>[P74] Establishment of Porcine Embryonic Stem Cells Using Simplified Medium and Feeder-free Adaptation <2023년 정기 학술대회 포스터 발표>[P72] Establishment of canine adipose-derived mesenchymal stem cells for clinical application

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공지 <2023년 정기 학술대회 포스터 발표>[P73] Therapeutic effect of cardiovascular spheroids generated by microfluidic concave system